重组抗DNA PKcs[Y393]（ab32566）

使用最终浓度为700 ng/mL的pAG-MNA酶、2 x 10^5 U2OS细胞和5µg ab ab32566[Y393]进行ChIC/CUT&RUN。所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序，测序深度为1000万读。阴性IgG对照约172730图中还显示了。

可以下载映射读取的其他屏幕截图在这里.

日内瓦大学拥有与ChIC（染色质免疫清洗）方法相关的专利。

Western blot假彩色图像：稀释1/1000的抗-DNA PKcs抗体[Y393]染色，以绿色显示；鼠抗CANX[CANX/1543](ab238078型)以1/20000稀释度进行负载控制染色，以红色显示。在Western blot中，ab32566显示与DNA PKcs特异结合。在野生型A549细胞裂解物中观察到450kDa的条带，在PRKDC敲除细胞系中没有观察到该大小的信号。为了生成此图像，分析了野生型和PRKDC敲除A549细胞裂解物。首先，样品在SDS-PAGE凝胶上运行，然后转移到硝化纤维素膜上。在4°C下与一级抗体孵育过夜之前，在TBS-0.1%吐温®20（TBS-T）中的3%牛奶中封闭膜。将印迹在TBS-T中洗涤四次，在室温下与第二抗体孵育1小时，再次洗涤四次，然后成像。使用的二级抗体是山羊抗兔IgG H&L 800CW和山羊抗小鼠IgG H&L 680RD，稀释度为1/2000。

车道1：野生型HAP1细胞裂解物（20µg）
2号车道：DNA PKcs敲除HAP1细胞裂解物（20µg）
3号车道：K562细胞裂解物（20µg）
4号车道：SH-SY5Y细胞裂解液（20µg）
1-4车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在470 kDa下观察到ab32566。红色-装载控制，约7291，在52 kDa下观察到。

ab32566被证明与野生型HAP1细胞中的DNA PKC特异性反应。检测DNA PKcs敲除样品时未观察到条带。对野生型和DNA PKCs敲除样品进行SDS-PAGE。ab32566和约7291（α-微管蛋白负荷控制）稀释1/1000和1/10000，并在4°C下培养过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye^®800CW）预吸附床(ab216773号)和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸附床(约216776)二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1小时。

用纯化的ab32566以1/50的工作稀释度对石蜡包埋的人扁桃体进行免疫组织化学染色。使用的二级抗体是兔IgG的HRP聚合物。用苏木精对样品进行反染色。使用pH 9.0的Tris-EDTA缓冲液进行抗原检索。

用稀释度为1/100的纯化ab32566对HeLa细胞（用4%PFA固定）进行免疫荧光染色。Alexa Fluor®555山羊抗兔抗体用作次级抗体，稀释度为1/200。右侧面板显示DAPI反训练。

阻塞缓冲区：5%NFDM/TBST

稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

以1/5的工作稀释度用未纯化的ab32566对石蜡包埋的人扁桃体进行免疫组织化学染色。使用的二级抗体是兔IgG的HRP聚合物。用苏木精对样品进行反染色。使用pH 9.0的Tris-EDTA缓冲液进行抗原检索。

用稀释度为1/10的未纯化ab32566对HeLa细胞（用4%PFA固定）进行免疫荧光染色。Alexa Fluor公司^®555羊抗兔抗体作为次级抗体，稀释度为1/200。右侧面板显示DAPI反训练。

阻塞缓冲区：5%NFDM/TBST

稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

未经纯化的ab32566，稀释1/50，用免疫组织化学方法对石蜡包埋的人类乳腺癌组织中的DNA-PKcs进行染色。