重组抗细胞角蛋白19抗体[EP1580Y]-细胞骨架标记（ab52625）

ab52625染色野生型MCF7细胞（上面板）和KRT19基因敲除MCF7细胞（下面板）中的细胞角蛋白19。用4%多聚甲醛（10min）固定细胞，用0.1%Triton X-100渗透5min，用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1h，用ab52625在1/100稀释度下孵育ab7291（小鼠单克隆抗体至α-微管蛋白）在1/1000稀释度下，在+4°C下过夜，然后在室温下用山羊抗兔IgG的二级抗体（Alexa Fluor®488）进一步培养1h(ab150081号)鼠源性抗体（Alexa g/Ig2/Ig2/ml）(ab150120型)2μg/ml（红色显示）。用DAPI标记细胞核DNA。
这张照片是用共焦显微镜（徕卡微系统公司，TCSP8）拍摄的。

1/400稀释度纯化ab52625对石蜡包埋人皮肤的免疫组化染色。用预先稀释的兔/鼠IgG的HRP聚合物作为二级抗体，用苏木精反染色。用pH9.0的Tris-EDTA缓冲液进行抗原回收。用PBS代替原抗体作为阴性对照，如插图所示。

人肝细胞癌细胞系HepG2细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析，细胞角蛋白19（绿色）用纯化的ab52625在1/500处标记。细胞用4%多聚甲醛固定，0.1%曲通X-100渗透。ab150077，Alexa Fluor公司^®以488株羊抗兔IgG（1/1000）为二级抗体。细胞用ab7291，抗微管蛋白（小鼠单克隆抗体）为1/1000，随后ab150120型亚历山福禄^®594山羊抗鼠二级（1/1000）。细胞核用DAPI（蓝色）复染。

阴性对照1，兔源性抗体和抗鼠二级抗体(ab150120型)被利用了。阴性对照2，ab7291采用小鼠一级抗体，其次为抗兔二级抗体(ab150077).

亚历山福禄^®488个(ab192643号)还有Alexa Fluor^®647年(ab192980号)此克隆可使用共轭版本。

阻塞缓冲器：5%NFDM/TBST

稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

ab52625流式细胞术检测MCF-7细胞角蛋白19。细胞用4%多聚甲醛固定，用90%甲醇渗透，样品与1/80稀释度的原抗体孵育。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488）以1/2000稀释度作为次级抗体。

同型对照：兔单克隆IgG（黑色）

未标记对照：未与一级抗体和二级抗体（蓝色）孵育的细胞。

亚历山福禄^®488个(ab192643号)还有Alexa Fluor^®647年(ab192980号)此克隆可使用共轭版本。

未纯化的ab52625在乳腺癌组织中呈阳性染色。

在开始IHC染色前，进行热介导的抗原回收。

MCF-7细胞的免疫荧光染色（固定在4%PFA中，用0.1%tritonx100渗透）用纯化的ab52625稀释1/200进行免疫荧光染色。Alexa Fluor公司^®以488只山羊抗兔抗体为二级，稀释1/200，用DAPI反染细胞。

重叠直方图显示HeLa（来自宫颈腺癌的人类上皮细胞系）细胞被未纯化的ab52625染色（红线）。细胞用80%甲醇固定（5分钟），然后用0.1%PBS吐温渗透20分钟。然后将细胞培养在1x PBS/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸中，以阻断非特异性蛋白质相互作用，然后在22℃下用抗体（ab52625，1/100稀释度）30分钟。使用的二级抗体是DyLight^®488山羊抗兔IgG（H+L）(ab96899号)在1/500稀释度下在22℃下30分钟。同型对照抗体（黑线）为兔IgG（单克隆）（1µg/1x10）⁶电池）在相同的条件下使用。采集了超过5000个事件。在相同条件下，用4%多聚甲醛（10min）固定/0.1%PBS-Tween渗透20min的HeLa细胞呈阳性信号。

未纯化的ab52625在子宫内膜癌组织中呈阳性染色。

在开始IHC染色前，进行热介导的抗原回收。

未纯化的ab52625在胶质瘤组织中呈阴性染色。

在开始IHC染色前，进行热介导的抗原回收。

胃腺癌组织中未纯化的ab52625呈阳性染色。

在开始IHC染色前，进行热介导的抗原回收。