重组抗环素D1[希腊语]希腊语[EPR2241]-C端子（ab134175）

阻塞/稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

在Leica Bond上进行的大鼠食道福尔马林固定石蜡包埋组织切片中ab134175染色Cyclin D1的IHC图像。用柠檬酸钠缓冲液（pH6，表位回收溶液1）使用热介导的抗原回收预处理切片20分钟。然后在室温下将切片与5μg/ml工作浓度的ab134175孵育15分钟，并使用HRP共轭紧凑聚合物系统进行检测。DAB被用作显色剂。然后用苏木精对切片进行复染，并用DPX固定。二级对照组中未使用一级抗体（如插图所示）。
对于其他IHC染色系统（自动化和非自动化），客户应优化可变参数，如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体孵育时间。

使用稀释1/50的纯化ab134175对Ramos（人类Burkitt淋巴瘤细胞系）细胞（固定在4%PFA中，用0.1%Triton X 100渗透）进行免疫荧光染色。Alexa Fluor公司^®488羊抗兔抗体作为次级抗体，稀释1/500，用DAPI对细胞进行复染。

负极控制显示在右下面板中-对于负极控制，Alex Fluor^®594只山羊抗鼠药以1/500的稀释度使用。

用稀释度为1/100的纯化ab134175对石蜡包埋的人子宫内膜腺癌进行免疫组织化学染色。HRP山羊抗兔(ab97051型)以1/500的稀释度作为二级抗体，并用苏木精对样品进行复染。使用pH 9.0的Tris-EDTA缓冲液进行抗原检索。

使用PBS代替一级抗体作为阴性对照（插图）。

使用抗CCND1蛋白ab134175的兔单克隆抗体，通过标准SP方法，使用224个石蜡切片，在3µm玻片上对人类头颈部鳞癌组织进行免疫组织化学。

面板C：细胞周期蛋白D1低表达的一个例子。

面板G：高Cyclin D1表达的示例。

有关完整图像，请参阅纸张。

MG-63细胞在37°C下与溶媒对照（0μM）和不同浓度的3-氨基苯甲酰胺（3-AB）孵育24小时(约141069). 如文献所述，MG-63细胞中cyclin D1（未纯化的ab134175）表达减少与3-氨基苯甲酰胺（3-AB）浓度增加相关。

用RIPA缓冲液（含蛋白酶抑制剂和原钒酸钠）制备全细胞裂解物，将每个裂解物10μg加载到凝胶上，并在还原条件下运行WB。转移后，使用5%牛血清白蛋白将膜封闭一小时，然后用未纯化的ab134175以1/500稀释度和约82261μg/ml，4°C过夜。抗体结合使用抗兔HRP次级抗体(ab97051型)稀释1/10000，并使用ECL开发解决方案进行可视化。

KN-93处理的MCF7（人乳腺癌细胞系）细胞中未纯化的ab134175染色Cyclin D1(公元120980年).

细胞用100%甲醇固定（5min），然后用1%牛血清白蛋白/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween封闭1h。然后用ab134175以10μg/ml和约7291以1µg/ml的浓度在+4°C下过夜，然后在室温下与山羊进一步孵育1小时抗兔Alexa 488次级(约150081)2μg/ml（以绿色显示）和山羊抗鼠Alexa 594次级(约150120)浓度为2μg/ml（以伪红色显示）。核DNA用DAPI标记为蓝色。

阴性对照：1–兔一级和抗鼠二级抗体；2–小鼠一级抗体和抗兔二级抗体。对照1和2表明所使用的一级抗体和二级抗体之间没有非特异性反应。

人食管福尔马林固定石蜡包埋组织切片中ab134175染色细胞周期蛋白D1的IHC图像*，在徕卡邦德上进行。用柠檬酸钠缓冲液（pH6，表位回收溶液1）使用热介导的抗原回收预处理切片20分钟。然后在室温下将切片与5μg/ml工作浓度的ab134175孵育15分钟，并使用HRP共轭紧凑聚合物系统进行检测。DAB被用作显色剂。然后用苏木精对切片进行复染，并用DPX固定。二级对照组中未使用一级抗体（如插图所示）。
对于其他IHC染色系统（自动化和非自动化），客户应优化可变参数，如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体孵育时间。
*组织取自人类研究组织库，由NIHR剑桥生物医学研究中心支持

石蜡包埋人套细胞淋巴瘤组织的免疫组织化学分析，用未纯化的ab134175在1/100稀释度下标记细胞周期蛋白D1。

在开始IHC染色方案之前，执行热介导抗原检索。

阻塞/稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

阻塞/稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

阻塞和稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

HeLa（宫颈腺癌人上皮细胞系）细胞的免疫细胞化学分析，在1/200稀释度下用ab134175标记Cyclin D1。细胞被多聚甲醛固定，并用0.5%Triton X-100在PBS中渗透。在22°C下与一级抗体孵育1小时。免疫染色后用DAPI对细胞进行复染。

参见Abreview

ab134175（纯化）在A431（人表皮样癌细胞系）细胞中的1/30免疫沉淀细胞周期蛋白D1。在western blotting中，使用HRP结合的山羊抗兔IgG作为二级抗体（1/1000）。

阻塞/稀释缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。