重组抗-CXCR4抗体[UMB2]（ab124824）

Jurkat（人类T细胞白血病T淋巴细胞）细胞的细胞内流式细胞术分析，以1/260稀释度（10µg/ml）的纯化ab124824标记CXCR4。细胞用4%多聚甲醛固定。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488,约150077)二级抗体按1/2000稀释度使用。同位素对照-兔单克隆IgG(约172730)-黑色。未标记控件-蓝色。未处理细胞-绿色

小鼠E14.5大脑在1/250（10.8μg/mL）时用ab124824标记CXCR4的免疫组织化学（冷冻）分析。切片用4%PFA固定，并用0.2%Triton X-100渗透约150077lexaFluor公司^®488羊抗兔次级抗体为1/1000（2μg/mL）。细胞核用DAPI复染蓝色。使用柠檬酸钠缓冲液（10mM柠檬酸盐pH 6.0+0.05%吐温-20）进行热介导抗原回收

小鼠胚胎大脑染色阳性。

正常人组织标本中CXCR4表达的免疫组织化学检测

使用ab124824以5μ/ml的浓度在4°C下过夜，在所示PFA固定、石蜡包埋的人体组织中检测到CXCR4。

A、 肾脏。B、 肾上腺。C、 小脑。D、 骨髓，棕色染色：CXCR4，绿色染色：CD45。E、 脾脏。F、 睾丸。G、 肺。H、 冒号。

运行缓冲区：MOPS。

条件：变性/还原。

该印迹是在MOPS缓冲系统下使用4-12%Bis-Tris凝胶生成的。凝胶在200V下运行60分钟，然后在30V下转移到硝化纤维膜上70分钟。在与ab124824（抗CXCR4）和约7671（加载控制），在4°C下过夜。成像前，使用标记的山羊抗兔（H+L；绿色）和标记的山羊抗鼠（H+L；红色）在室温下以1:10000稀释1小时检测抗体结合。

通过转染细胞的免疫荧光染色鉴定UMB-2（ab124824）。表达CCR7或CXCR4的HEK-293细胞未暴露或暴露于100 ng/ml MIP-3或100 ng/ml SDF-1 30 min，随后固定并用1µg/ml抗CCR7{1188}或抗CXCR4{UMB-2}以1∶100的稀释度进行免疫荧光染色。注意，UMB-2仅在CXCR4细胞的质膜水平上检测到显著的免疫荧光，但在CCR7表达细胞中没有检测到，SDF-1暴露诱导CXCR4受体免疫染色从质膜快速转移到细胞液中。显示了三个独立实验之一的代表性结果。比例尺，20µm。

大鼠E14.5大脑在1/250（10.8μg/mL）时用ab124824标记CXCR4的免疫组织化学（冷冻）分析。切片用4%PFA固定，并用0.2%Triton X-100渗透约150077lexaFluor公司^®488羊抗兔次级抗体为1/1000（2μg/mL）。细胞核用DAPI复染蓝色。使用柠檬酸钠缓冲液（10mM柠檬酸盐pH 6.0+0.05%吐温-20）进行热介导抗原回收

大鼠胚胎大脑染色阳性。

未经纯化的ab124824，1/50稀释，通过免疫组织化学染色石蜡包埋的人宫颈癌组织中的CXCR4。

在开始IHC染色方案之前，执行热介导抗原检索。

用纯化的ab124824以1/250的工作稀释度对Jurkat细胞进行免疫荧光染色，并用DAPI进行反染色。微管蛋白用小鼠抗微管蛋白以1/1000的稀释度染色(约7291)和Alexa Fluor^®594羊用1/500稀释液抗鼠(ab150120型) . 二级抗体是约150077Alexa Fluor公司^®488羊抗兔药，稀释比例为1/500。细胞固定在4%PFA中，并使用0.1%Triton X 100进行渗透。阴性对照显示在底部中间和右侧面板中-对于第一个阴性对照，使用纯化的ab124824，稀释度为1/200，然后使用Alexa Fluor^®555羊抗鼠抗体，稀释度为1/500，用于第二阴性对照鼠一级抗体(约7291)和抗兔二级抗体(约15007)使用了。

抗CXCR4抗体特异性的Western blot分析。稳定转染表达CCR7或CXCR4的HEK-293细胞的膜制剂在10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶上分离，并在硝化纤维素膜上印迹。然后用亲和纯化的1µg/ml抗CCR7{1188}或抗CXCR4{UMB-2}杂交瘤上清液以1:100的稀释度培养膜。使用增强化学发光法开发印迹。注意，UMB-2仅在CXCR4中检测到预期分子量的条带，但在CCR7转染细胞中未检测到。另外两个实验给出了类似的结果。

封闭和稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

我们建议在分解后不要煮沸样品。

阻塞缓冲区：5%NFDM/TBST

稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

以1/500工作稀释度纯化的ab124824对石蜡包埋人膀胱癌进行免疫组织化学染色。使用的二级抗体是ab97051型一种HRP结合的山羊抗兔IgG（H+L），稀释度为1/500。用苏木精对样品进行反染色。使用pH 9.0的Tris-EDTA缓冲液进行抗原检索。使用PBS代替一级抗体作为阴性对照，如插图所示。

ab124824染色Jurkat细胞。细胞在-20°C下100%甲醇固定5分钟，然后在室温下在1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸和0.1%PBS-Tween中孵育1小时，以使细胞渗透并阻断非特异性蛋白质相互作用。然后将细胞与抗体（ab124824，5ug/ml）在+4°C下孵育过夜。二级抗体（伪绿色）为山羊抗狂犬病IgG H&L（Alexa Fluor®488）预吸附抗体(约150081)在室温下以1/1000的稀释度使用1小时。Alexa Fluor®594 WGA用于在室温下以1/200稀释1小时的方式标记质膜（伪彩色红色）。DAPI用于在室温下以1.43µM的浓度对细胞核（伪蓝色）染色1小时。

未经纯化的ab124824，1/50稀释，通过免疫组织化学染色石蜡包埋人卵巢腺癌组织中的CXCR4。

在开始IHC染色方案之前，执行热介导抗原检索。

未经纯化的ab124824，1/50稀释，通过免疫组织化学染色石蜡包埋的人类扁桃体组织中的CXCR4。

在开始IHC染色方案之前，执行热介导抗原检索。

参见Abreview