重组防Brd4抗体[EPR5150（2）]（ab128874）

车道1：野生型HAP1细胞裂解物（20µg）
车道2：Brd4敲除HAP1细胞裂解物（20µg）
车道3：HeLa细胞裂解物（20µg）

1-4车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在150 kDa时观察到ab128874。红色-装载控制，ab8245，在37 kDa下观察到。
当使用Brd4敲除样本时，ab128874被证明识别Brd4，以及附加的交叉反应带。野生型和Brd4基因敲除的样品进行SDS-PAGE分析。ab128874和ab8245（GAPDH的负荷控制）分别在1/1000和1/10000稀释，并在4°C下培养过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye）建立印迹^®800CW）预吸收(ab216773号)山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收(ab216776号)在室温下进行1小时的二次成像。

在感染HSV-1后，用ab128874在1/500稀释度（红色）和CDK9（绿色）共同定位的HeLa细胞的免疫细胞化学分析。细胞用4%多聚甲醛固定（室温10min），用0.2%tritonx-100渗透（10min）。亚历山大^®-在1/1000稀释度下使用结合二级抗体。核反染色是大皮9蓝）。

来自Ren等人的图5b。

根据Ren等人的知识共享许可证复制公共科学图书馆. 2016年10月；12（10）：e10059502016年10月20日在线发布内政部：10.1371/journal.ppat.1005950 

人结肠癌组织中未纯化ab128874 1/100稀释染色Brd4免疫组化。

在开始IHC染色前，进行热介导的抗原回收。

用1/50稀释度（10µg/mL）纯化的ab128874标记Brd4（红色）的SW480（人大肠腺癌上皮细胞）细胞内流式细胞术分析。细胞用80%甲醇固定，0.1%吐温-20渗透。山羊抗兔IgG（Alexa fluor^®488页）(ab150077)以1/2000稀释度作为二级抗体。黑兔单克隆IgG（黑色）(ab172730).Blue（未标记对照）-未与一级抗体和二级抗体（蓝色）孵育的细胞

车道1-2：合并信号（红色和绿色）。绿色-在220 kDa时观察到ab128874。红负荷对照小鼠在125kDa处观察到抗长春花蛋白。

在Western blot中，ab128874与野生型细胞中的Brd4发生反应，在Brd4敲除样品中观察到信号丢失。野生型和BRD4基因敲除细胞裂解物经SDS-PAGE鉴定。在TBS-T（0.1%吐温）的3%牛奶中，膜被封闭^®)在用ab128874和小鼠抗长春新碱分别在4°C和1/200稀释度和1/20000稀释度下孵育过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye）孵育印迹^®800CW）预吸收(ab216773号)山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收(ab216776号)二级抗体在成像前在室温下稀释1小时。

人肝细胞系HepG2细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析，用纯化的ab128874在1/100处标记Brd4（A组）。细胞用4%多聚甲醛固定，0.1%曲通X-100渗透。Alexa Fluor公司^®以488株羊抗兔IgG（1/200）为二级抗体。DAPI（蓝色）被用作核复染（B组）。

未纯化ab128874（1/500）Brd4染色于HeLa（人宫颈腺癌上皮细胞系）细胞（绿色）。细胞固定在多聚甲醛中，在0.5%Triton X100/PBS中渗透，并用DAPI复染以突出细胞核（红色）。

更多实验细节请参考Abreview。

见Abreview

缓冲液和稀释浓度：TBDM/5%

封闭稀释缓冲液及浓度：5%NFDM/TBST