重组抗-Brd4抗体[EPR5150（2）]（ab128874）

车道1：野生型HAP1细胞裂解物（20µg）
车道2：Brd4敲除HAP1细胞裂解物（20µg）
3号车道：HeLa细胞裂解物（20µg）

1-4车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在150 kDa时观察到ab128874。红色-装载控制，约8245，在37 kDa下观察到。
当使用Brd4敲除样品以及其他交叉反应带时，ab128874被证明能够识别Brd4。对野生型和Brd4基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。ab128874和约8245（GAPDH的负荷控制）分别在1/1000和1/10000稀释，并在4°C下培养过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye^®800CW）预吸附床(ab216773号)和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸附床(约216776)二级抗体在成像前在室温下以1/10000稀释1小时。

HeLa细胞的免疫细胞化学分析显示，感染HSV-1后，使用ab128874在1/500稀释度（红色）下与CDK9（绿色）共定位BRD4。用4%多聚甲醛固定细胞（室温下10分钟），用0.2%Triton X-100渗透细胞（10分钟）。AlexaFluor公司^®-以1/1000稀释度使用结合二级抗体。核反染为DAPI 9蓝色）。

根据Ren等人的图5b。

根据Ren等人的知识共享许可复制公共科学图书馆-病理学2016年10月；12（10）：e10059502016年10月20日在线发布数字对象标识：10.1371/日志.ppat.1005950 

用免疫组织化学方法对人结肠癌组织中未纯化的ab128874进行1/100稀释染色Brd4。

在开始IHC染色方案之前，执行热介导抗原检索。

用纯化的ab128874在1/50稀释度（10µg/mL）下对标记Brd4（红色）的SW480（人大肠腺癌上皮细胞）细胞进行细胞内流式细胞术分析。细胞用80%甲醇固定，并用0.1%吐温-20渗透。山羊抗兔IgG（Alexa Fluorr^®488) (约150077)以1/2000稀释度作为二级抗体。黑色-兔单克隆IgG（黑色）(约172730). 蓝色（未标记对照）-未与一级抗体和二级抗体孵育的细胞（蓝色）

1-2车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在220 kDa下观察到ab128874。红负荷对照小鼠在125kDa下观察到抗Vinculin。

Western blot显示ab128874与野生型细胞中的Brd4反应，在Brd4敲除样品中观察到信号丢失。对野生型和BRD4敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。TBS-T（0.1%吐温）中3%牛奶中的膜被堵塞^®)然后分别以1:200和1:20000的稀释度在4°C下与ab128874和小鼠抗Vinculin孵育过夜。印迹与山羊抗兔IgG H&L（IRDye）孵育^®800CW）预吸收床(ab216773号)和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收床(约216776)二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。

用纯化的ab128874标记Brd4的HepG2（人肝细胞系）细胞的免疫细胞化学/免疫荧光分析（图A）。细胞用4%多聚甲醛固定，并用0.1%Triton X-100渗透。Alexa Fluor公司^®用488-结合羊抗兔IgG（1/200）作为二级抗体。DAPI（蓝色）用作核染色（B组）。

HeLa（宫颈腺癌人上皮细胞系）细胞（绿色）中未纯化的ab128874（1/500）染色Brd4。细胞在多聚甲醛中固定，在0.5%Triton X100/PBS中渗透，并用DAPI进行复染，以突出细胞核（红色）。

有关更多实验细节，请参阅Abreview。

参见Abreview

封闭和稀释缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST

封闭和稀释缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST