重组抗α-突触核蛋白抗体[MJFR1]（ab138501）

车道1-2：合并信号（红色和绿色）。绿色-在18 kDa时观察到ab138501。红色-抗GAPDH抗体[6C5]-负载控制(ab8245)在37 kDa下观察。

westernblot显示ab138501与野生型HEK-293T细胞中的SNCA发生反应。敲除细胞系时出现信号丢失ab255433（敲除细胞裂解物ab263769号)被利用了。对野生型HEK-293T和SNCA基因敲除的HEK-293T细胞裂解液进行SDS-PAGE分析。在0.1%TBST和3%脱脂奶粉中室温下封膜1h。ab138501和抗GAPDH抗体[6C5]-负荷控制(ab8245)在4℃下过夜，稀释度分别为1:10000和1:20000。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye）制备印迹^®800CW）预吸收(ab216773号)山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收(ab216776号)二级抗体在成像前在室温下稀释1小时。

正常人大脑皮质α-突触核蛋白染色的IHC图像福尔马林固定石蜡包埋组织切片，在徕卡邦德上进行™ 系统采用标准方案F。用柠檬酸钠缓冲液（pH6，表位检索液1）对切片进行热介导抗原回收预处理20分钟。然后在室温下用5µg/ml的ab138501培养15分钟，并使用HRP共轭紧密聚合物系统进行检测。用DAB作显色剂。然后用苏木精复染切片并用DPX固定。

对于其他IHC染色系统（自动和非自动），客户应优化可变参数，如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体培养时间。

ab138501染色野生型Hap1细胞中的α-突触核蛋白（上图）和SNCA基因敲除的Hap1细胞（下图）。用4%多聚甲醛（10min）固定细胞，用0.1%tritonx-100渗透5min，然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中阻断1h。然后用浓度为0.1μg/ml的ab138501培养细胞，并ab7291（小鼠单克隆抗体对α-微管蛋白）在4°C下以1/1000稀释过夜，随后在室温下用山羊抗兔IgG的次级抗体（Alexa Fluor）进一步孵育1h^®488页）(ab150081号)以2μg/ml（绿色显示）和山羊抗小鼠IgG的二级抗体（Alexa Fluor^®594页）(ab150120型)2μg/ml（红色显示）。用DAPI标记细胞核DNA。
这张照片是用共焦显微镜（徕卡微系统公司TCS SP8）拍摄的。

免疫细胞化学/免疫荧光分析U87-MG（人胶质母细胞瘤星形细胞瘤上皮细胞系）细胞，用纯化的ab138501在1/150稀释度下标记α-突触核蛋白（左图）。细胞用4%多聚甲醛固定。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®以555）（1/200）作为二级抗体。DAPI（蓝色）被用作核反染色（右图）。

1-4车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在14kDa时观察到ab138501。红色-装载控制，ab8245，在37 kDa下观察到。

ab138501在野生型HAP1细胞中与SNCA特异性反应。SNCA基因敲除样品未观察到条带。野生型和SNCA基因敲除样品进行SDS-PAGE分析。Ab138501和ab8245（小鼠抗GAPDH负荷对照）分别在4℃和1/10000稀释度下培养过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye）制备印迹^®800CW）预吸收ab216773号山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收ab216776号二级抗体在1/10000稀释度下在室温下进行1小时成像。

重叠直方图显示用ab138501染色的HAP1野生型（绿线）和HAP1-SNCA基因敲除细胞（红线）。细胞用80%甲醇固定（5分钟），然后用0.1%PBS Triton X-100渗透15分钟。然后将细胞培养在1x PBS/10%正常山羊血清中，以阻断非特异性蛋白质相互作用，然后在22°C下用抗体（ab138501，1µg/ml）30分钟。使用的次级抗体是Alexa Fluor^®488山羊抗兔IgG（H&L）预吸收(ab150081号)在1/2000稀释度下，在22℃下30分钟。一种兔IgG同种对照抗体(ab172730)在与原抗体相同的浓度和条件下使用（HAP1野生型-黑线，HAP1-SNCA敲除-灰线）。未标记的样本也用作对照（为了简单起见，不显示此行）。使用50mw蓝光激光器（488nm）和530/30带通滤波器采集了超过5000个事件。 

封闭稀释缓冲液及浓度：5%NFDM/TBST

2%多聚甲醛固定HeLa（人宫颈腺癌上皮细胞）细胞内流式细胞术分析1/200稀释度下用纯化ab138501标记α-突触核蛋白。次级抗体为羊抗兔IgG（FITC），稀释1/150。 

同型对照为兔单克隆IgG（绿线）。 

免疫细胞化学/免疫荧光分析U87-MG（人胶质母细胞瘤星形细胞瘤上皮细胞系）细胞，用未纯化的ab138501标记α-突触核蛋白（1/15稀释度）（左图）。细胞用4%多聚甲醛固定。山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®以555）（1/200）作为二级抗体。DAPI（蓝色）被用作核反染色（右图）。

正常人黑质-福尔马林固定石蜡包埋组织切片中α-突触核蛋白染色的IHC图像™ 系统采用标准方案F。用柠檬酸钠缓冲液（pH6，表位检索液1）对切片进行热介导抗原回收预处理20分钟。然后在室温下用5µg/ml的ab138501培养15分钟，并使用HRP共轭紧密聚合物系统进行检测。用DAB作显色剂。然后用苏木精复染切片并用DPX固定。

对于其他IHC染色系统（自动和非自动），客户应优化可变参数，如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体培养时间。

帕金森人黑质-福尔马林固定石蜡包埋组织切片中α-突触核蛋白染色的IHC图像™ 系统采用标准方案F。用柠檬酸钠缓冲液（pH6，表位检索液1）对切片进行热介导抗原回收预处理20分钟。然后在室温下用5µg/ml的ab138501培养15分钟，并使用HRP共轭紧密聚合物系统进行检测。用DAB作显色剂。然后用苏木精复染切片并用DPX固定。

对于其他IHC染色系统（自动和非自动），客户应优化可变参数，如抗原回收条件、初级抗体浓度和抗体培养时间。

*从人类研究组织库获得的组织，由NIHR剑桥生物医学研究中心支持

用纯化的ab138501在1/600稀释度下从人胎脑组织中免疫沉淀α-突触核蛋白。免疫沉淀用纯化的ab138501进行Western印迹。以羊抗兔IgG（H+L）、过氧化物酶偶联物为次级抗体，稀释1/1000。封闭稀释缓冲液和浓度：5%NFDM/TBST。

人肾透明细胞癌免疫组织化学（福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片）分析1/150稀释度纯化ab138501标记α-突触核蛋白。用pH9的Tris/EDTA缓冲液进行热介导抗原回收。以兔IgG的HRP预处理聚合物作为二级抗体。苏木精反染色。

用未纯化的ab138501在1/50稀释度下从人胎脑组织中免疫沉淀α-突触核蛋白。免疫沉淀用未纯化的ab138501进行Western印迹。以羊抗兔IgG（H+L）、过氧化物酶偶联物为次级抗体，稀释1/1000。封闭稀释缓冲液及浓度：5%NFDM/TBST

人肾透明细胞癌免疫组织化学（福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片）分析1/15稀释度下未纯化ab138501标记α-突触核蛋白。用pH9的Tris/EDTA缓冲液进行热介导抗原回收。以兔IgG的HRP预处理聚合物作为二级抗体。苏木精反染色。

免疫组织化学（福尔马林/PFA固定石蜡包埋切片）分析人脑组织用未纯化ab138501标记的α-突触核蛋白，稀释度为1/300。

在开始IHC染色前，进行热介导的抗原回收。

2%多聚甲醛固定HeLa（人宫颈腺癌上皮细胞）细胞内流式细胞术分析1/20稀释度下用未纯化的ab138501标记α-突触核蛋白。次级抗体为羊抗兔IgG（FITC），稀释1/150。 

同型对照为单克隆抗体IgG（绿线）。