重组抗-HIF-1α[希腊语]希腊语[EPR16897]（ab179483）

使用最终浓度为700 ng/µL的pAG-MNA酶，经Cocl2（500μM 20h+4h）和MG-132（10µM 4h）以及5µg ab179483处理的2.5 x 10^5 HeLa（人宫颈腺癌上皮细胞系）细胞进行ChIC/CUT&RUN。所得DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序，测序深度为1000万读。阴性IgG对照约172730图中还显示了。

可以下载映射读取的其他屏幕截图在这里.

日内瓦大学拥有与ChIC（染色质免疫清洗）方法相关的专利。

用CoCl2处理HeLa细胞（350μM 20h+4h）并添加MG-132（10μM 4h），制备染色质。细胞用1%甲醛固定10分钟。ChIP采用10⁷细胞和8µgab308433型[EPR16897-145]或ab179483[EPR1697]。ChIP DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序，深度为3000万读。还显示了输入控件。

用CoCl2（350μM 20h+4h）和MG-132（10µM 4h）处理的HeLa细胞制备染色质。细胞用1%甲醛固定10分钟。ChIP采用10⁷细胞和8µgab308433型[EPR16897-145]或ab179483[EPR1697]。ChIP DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序，深度为3000万读。还显示了输入控件。

用CoCl2处理HeLa细胞（350μM 20h+4h）并添加MG-132（10μM 4h），制备染色质。细胞用1%甲醛固定10分钟。ChIP采用10⁷细胞和8µgab308433型[EPR16897-145]或ab179483[EPR1697]。ChIP DNA在Illumina NovaSeq 6000上测序，深度为3000万读。还显示了输入控件。

1-6车道：合并信号（红色和绿色）。绿色-在105 kDa下观察到ab179483。红色-装载控制，ab24834号，在50 kDa下观察到。

在野生型HAP1处理的DMOG（0.5mM 18hr）细胞中，ab179483与HIF-1α特异性反应，因为HAP1敲除处理的DMOG（0.5mM 18hr）敲除细胞中信号丢失。野生型和HAP1敲除样品进行SDS-PAGE分析。ab179483和ab24834号（小鼠抗组蛋白H3负荷对照）分别在4°C下以1/1000稀释度和1/10000稀释度孵育过夜。用山羊抗兔IgG H&L（IRDye^®800CW）预吸收床邮编：216773和山羊抗鼠IgG H&L（IRDye^®680RD）预吸收床约216776二级抗体在成像前在室温下以1/20000稀释1小时。

4%对甲醛固定、0.1%Triton X-100渗透HeLa（宫颈腺癌人上皮细胞）细胞的免疫荧光分析，在1/500稀释度下用ab179483标记HIF-1-alpha，然后用山羊抗兔IgG（Alexa Fluor^®488) (约150077)1/1000稀释的第二抗体（绿色）。共聚焦图像显示用DFO处理的HeLa细胞（1 mM，24 h）出现核染色。核反染为DAPI（蓝色）。用检测到Tubulin公元195889年（抗α-管蛋白小鼠单克隆抗体）（Alexa Fluor^®594），稀释度为1/200（红色）。

封闭和稀释缓冲液：5%NFDM/TBST

不同的结果是由于裂解物的制备方法。左图中的裂解物是通过RIPA裂解方法制备的。右图中的裂解物是用1%十二烷基硫酸钠热裂解法制备的。这种抗体在WB中1%SDS热裂解液中效果更好。

有关裂解液制备方案，请参阅方案部分的方案书和/或此处（可下载副本）。

封闭和稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

HIF-1α的表达由CoCl2诱导，MG-132维持（PMID:15836611）。

阻塞/稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。

封闭/稀释缓冲液：5%NFDM/TBST。